背景

分子診斷技術(shù)里，引物和探針是核心。引物是人工合成的寡核苷酸序列，作為核苷酸聚合起始的關(guān)鍵引導(dǎo)分子，其長(zhǎng)度一般在18到27個(gè)堿基對(duì)，這與 Tm 值及特異性有關(guān)，太長(zhǎng)（大于 38 個(gè)堿基對(duì)）會(huì)使延伸溫度超 74℃，超出 Taq DNA 聚合酶適宜反應(yīng)溫度范圍，影響酶活性與 DNA 復(fù)制。

在PCR過程中，引物至關(guān)重要，是 DNA 聚合酶啟動(dòng)復(fù)制提供起點(diǎn)。一個(gè)引物與靶區(qū)域一端的模板鏈互補(bǔ)配對(duì)，另一個(gè)與另一端互補(bǔ)結(jié)合，為聚合酶指明起始位置。PCR 啟動(dòng)、溫度升高使 DNA 模板鏈解旋成單鏈后，引物依堿基互補(bǔ)配對(duì)原則與特定區(qū)域結(jié)合，DNA 聚合酶識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)，從引物 3’端添加核苷酸，沿 5’到 3’端延伸新鏈，循環(huán)往復(fù)實(shí)現(xiàn) DNA 片段指數(shù)級(jí)擴(kuò)增，引物就像建高樓的基石，保障 PCR 高效推進(jìn)。

探針是帶標(biāo)記核酸序列，靠分子雜交與目標(biāo)核酸序列特異性結(jié)合，精準(zhǔn)探測(cè)目標(biāo)。是分子診斷關(guān)鍵''利器'',可為DNA或RNA序列，帶有如“信號(hào)燈”般的標(biāo)記物。生物樣本核酸分子多，無標(biāo)記時(shí)，探針與目標(biāo)核酸結(jié)合的微弱信號(hào)易被淹沒。有標(biāo)記物后，探針與目標(biāo)序列結(jié)合，能通過放射性同位素自顯影、熒光染料發(fā)光或化學(xué)物質(zhì)顯色等發(fā)出易捕捉信號(hào)，助研究者了解目標(biāo)核酸情況。

引物探針介紹